· полиакриламидгель должен состоять из мономера акриламида, исходного материала полимеризации, катализатора и смеси соли и буфера.
· акриламиди БИС (N,N'-метиленовый двойной акриламид) представляет собой мономерную форму гелевой матрицы.
· персульфат аммония запускает процесс полимеризации клея. Для приготовления клея требуется 10% раствор персульфата аммония, приготовленный в воде. Большая часть информации указывает на необходимость активного использования. Однако 10% раствор можно хранить при температуре 4℃ в течение нескольких недель без значительной потери активности. Доведите до 10 мл и вылейте, когда клей не агрегирует.
Совет: процентакриламидв секвенировании клей и белковый клей не одно и то же. Если вы используете готовый раствор акриламида: BIS, убедитесь, что вы приобрели правильную бутылку.
· TEMED (N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамин) - катализатор, в коричневой бутылке, помещается в холодильник. Добавлять непосредственно перед заливкой клея.
· электрофорез полиакриламида стекло, используемое в электрофорезе, следует мыть до и после каждого раза. После электрофореза промыть мягкой щеткой и тканью в горячей мыльной воде, ополоснуть дистиллированной водой и дать высохнуть.
· влага и пыль могут вызвать с полым полимером. Перед электрофорезом очистите стеклянную пластину очистителем для стекол и протрите ее мягкой щеткой. Промойте дистиллированной водой и тщательно высушите бумажной салфеткой. Промывание 70% этанолом перед протиранием бумагой помогает очистить и ускорить высыхание. Последовательно добавьте образцы акриламида: BIS, вода, буферный раствор, персульфат аммония, TEMED. Хорошо встряхните и немедленно вылейте.
Нет необходимости дегазировать полиакриламид перед полимеризацией. (Раньше акриламид помещали в вакуум для удаления пузырьков, поскольку кислород ингибирует полимеризацию.)
Образцы наконечников для горизонтальной точки склеивания.
· положите в нижнюю коробку лист черной бумаги, на черном фоне сделайте небольшое отверстие для образца, чтобы было лучше видно.
· Буферный раствор для клея, заполненный непосредственно над коллоидом.
· если край имеет свет, включите свет, пусть свет освещает коллоид. Наберите образец в пипетку.
· с помощью автоматического пипетирующего устройства.
· в 10-200 мк1 жидкой движущейся точке можно использовать в большинстве точек образца. Для очень маленьких отверстий образца (менее 10 мк1) более удобна длинная головка пипетки, используемая для секвенирования клея.
· пипетирование только что погруженным в образец, вдыхание медленно движущейся жидкости. Образец может казаться липким из-за глицерина, а быстрое накачивание может привести к попаданию пузырьков воздуха в головку пипетки.
· образцы после вдыхания пипеточной головки, будет осторожно перемещать головку жидкости по краю трубки или протирая бумагой всасывать головку жидкости за пределами капель. Будьте осторожны, чтобы не всосать образец.
Поместите образец в отверстие для образца.
· пипетирующее устройство, чтобы поддерживать небольшое давление, заставляет образцы слегка перемещаться через напор переливающейся жидкости.
· головка пипетки, вставленная в буфер, немного выше точечных отверстий, поддерживает положительное давление. Наконечник пипетки можно вставить в небольшое отверстие.
· медленно и равномерно выдавливайте образцы. Наконечник пипетки помещается над точечным отверстием для образца, и образец погрузится в отверстие. Позвольте образцу погрузиться, чтобы заполнить отверстие для образца, вместо того, чтобы проталкивать его внутрь.
· как только последняя капля образца достигнет головки жидкости, жидкость переместится во вторую ветвь, медленно поднимите движение жидкости, выйдите из буфера
Как провести вертикальный отбор проб клея?
· вертикальные отверстия для образцов клея, образованные между двумя кусками стекла. При очень тонком клее головка пипетки даже не может быть вставлена между двумя стеклянными пластинами. Берегитесь глицерина! Поместите головку пипетки над отверстием для образца, и образец погрузится в отверстие.
· точечный образец перед тем, как положить вертикальную точку полипропиленового ацильного геля, отверстие для образца промыть. Смыть неполимеризованный акриламид и воду, которая может появиться на дне отверстия для образца. Вода может значительно уменьшить отверстие для образца. Используйте шприц объемом 25 мл или 50 мл и иглу 18-го калибра. Залейте буфер для электрофореза и тщательно промойте отверстие для образца.
· может быть трудно увидеть отверстие для образца, но в то же время, остальное легко. Если есть лишние отверстия, буфер для образца можно проверить с помощью бромфенолового синего.
Время публикации: 31 марта 2023 г.