· полиакриламидГель должен с помощью акриламидного мономера, начального материала полимеризации, катализатора и права соли и буферной смеси вместе.
· акриламиди BIS (n, N '- метилен двойной акриламид)- это гель-матрица мономера.
· Процесс начального адгезионного полимеризации аммония. Составление клея требует 10% раствора аммония перспекто, приготовленного в воде. Большая часть информации указывала на необходимость активного использования. Тем не менее, 10% раствор может быть размещен в 4 ℃ в течение нескольких недель без значительной потери активности. Сделайте до 10 мл и сбросьте, когда клей не может агрегировать.
Совет: процентакриламидВ секвенировании клея и белкового клея не то же самое. При использовании предварительного акриламида: раствора BIS, обязательно получите правильную бутылку.
· Temed (N, N, N ', N'- тетраметилтетилендиамин)- это катализатор в коричневой бутылке, помещенном в холодильник. Добавьте прямо перед наливкой клей.
· Полиакриламидный электрофорез, используемый стекло в электрофорезе, следует промывать до и после каждого раз. После электрофореза промыть мягкой щеткой и тканью в горячей мыльной воде, промойте дистиллированной водой и стойте для сушки.
· Влажность и пыль могут вызвать с полым полимером. Перед электрофорезом очистите стеклянную пластину стеклянной очисткой и протрите ее мягкой щеткой. Вымойте дистиллированной водой и тщательно высушите бумажным стеклом. Площание 70% этанолом перед вытиркой бумагой помогает очистить и ускорить сушку. Добавить образцы акриламида последовательно: бис, вода, буферный раствор, аммонийс -персульфат, Temed. Встряхните хорошо и налейте сразу.
Нет необходимости дегрессировать полиакриламид перед полимеризацией. (Акриламид использовался в вакууме для удаления пузырьков, потому что кислород ингибирует полимеризацию.)
Горизонтальный клей точка кончики образца.
· Поместите кусок черной бумаги в нижнюю коробку, черный фон, чтобы сделать некоторое отверстие для образца, чтобы увидеть более четко.
· Клейк, заполненный баком, прямо над коллоидом.
· Если край имеет свет, включите свет, пусть свет сияет коллоид. Нарисуйте образец в пипетку.
· Использование автоматического пипетирующего устройства.
· В 10-200 MU 1 точка перемещения жидкости может использоваться в большинстве точек на образце. Для очень маленьких отверстий для образцов (менее 10 мк1) длинная головка пипетки, используемая для секвенирования клея, является более удобной.
· Пипетирование только погружено в образцы, вдыхая медленно движущуюся жидкость. Образец может выглядеть липким с глицерином, и быстрое перекачнивание может втянуть пузырьки воздуха в головку пипетки.
· Образцы после вдыхания пипетирующей головки, будут осторожно перемещать на краю трубы или вытереть жидкую головку за пределы капель. Будьте осторожны, чтобы не сосать образец.
Поместите образец в отверстие для образца
· Пипетирующее устройство, чтобы поддерживать небольшое давление, заставьте образцы слегка перемещать переполненную жидкую головку.
· Пипетирующая головка, вставленная в буфер, немного выше, чем точечные отверстия, поддерживает положительное давление. Кончик пипетки может быть вставлен в небольшое отверстие.
· Медленно и неуклонно образцы. Кончик пипетки помещается над отверстием для образца точки, а образец будет погрузиться в отверстие. Пусть образец погрузится, чтобы заполнить отверстие для образца, а не вталкивать.
· После того, как последняя капля образца с жидкой головкой, жидкость перейдет на вторую ногу, медленно поднимает движение жидкости, выходит из буфера
Как сделать выборку вертикального клея?
· Выборочные отверстия для образца вертикального клея, образованные между двумя кусочками стекла. В очень тонком клеве головка пипетки даже не может быть вставлена между двумя стеклянными пластинами. Смотрите глицерин! Поместите головку пипетки на отверстие для образца, и образец погрузится в отверстие.
· Образец точки ранее, обязательно поместите вертикальную точку полипропиленового ацильного отверстия для образца промывки. Вымыть неполимеризованный акриламид и воду, которая может появиться на дне отверстия для образца. Вода может сделать отверстие для образца значительно меньше. Используйте шприц 25 мл или 50 мл и иглу 18-го калибра. Вылейте в буфер электрофореза и осторожно промойте отверстие для образца.
· Может быть трудно увидеть отверстие для образца, но в то же время остальное легко. Если есть избыточные отверстия, буфер для образцов может быть протестирован с бромфенолом синим.
Пост времени: март-31-2023