· полиакриламидгель должен состоять из мономера акриламида, исходного материала полимеризации, катализатора и смеси соли и буфера вместе.
· акриламиди БИС (N,N'-метилендвойной акриламид) представляет собой мономер в форме гелевой матрицы.
· персульфат аммония запускает процесс адгезионной полимеризации.Для приготовления клея необходим 10% раствор персульфата аммония, приготовленный на воде.Большая часть информации указывала на необходимость активного использования.Однако 10% раствор можно хранить при температуре 4 ℃ в течение нескольких недель без значительной потери активности.Сделайте до 10 мл и выбросьте, когда клей не слипнется.
Совет: процентакриламидпри секвенировании клей и белковый клей — это не одно и то же.Если вы используете готовый раствор акриламид: BIS, убедитесь, что вы выбрали подходящую бутылку.
· ТЕМЕД (N, N, N', N' - тетраметилэтилендиамин) - катализатор, в коричневой бутылке, помещенной в холодильник.Добавляйте непосредственно перед заливкой клея.
· Полиакриламидный электрофорез. Использованное при электрофорезе стекло следует мыть до и после каждого раза.После электрофореза промойте мягкой щеткой и тканью в горячей мыльной воде, промойте дистиллированной водой и высушите.
· Полый полимер может вызвать попадание влаги и пыли.Перед электрофорезом очистите стеклянную пластинку средством для мытья стекол и протрите ее мягкой щеткой.Промойте дистиллированной водой и тщательно высушите бумажной салфеткой.Промывка 70% этанолом перед протиранием бумагой помогает очистить и ускорить высыхание.Последовательно добавляйте образцы акриламида: БИС, воду, буферный раствор, персульфат аммония, ТЕМЕД.Хорошо встряхните и сразу вылейте.
Перед полимеризацией дегазировать полиакриламид не требуется.(Раньше акриламид помещали в вакуум для удаления пузырьков, поскольку кислород ингибирует полимеризацию.)
Наконечники для образцов с горизонтальной точкой склеивания.
· Положите лист черной бумаги в нижнюю коробку на черном фоне, чтобы сделать отверстие для образца и лучше видеть.
· Буфер, заполненный резервуаром для клея, непосредственно над коллоидом.
· если на краю есть свет, включите свет, пусть свет светится коллоидным.Наберите образец в пипетку.
· с использованием автоматического пипеточного устройства.
· в 10-200 мк 1 подвижная точка жидкости может использоваться в большинстве точек образца.Для очень маленьких отверстий для проб (менее 10 мкм) более удобна длинная головка пипетки, используемая для секвенирования клея.
· Пипетировать только что погруженный в образец образец, вдыхая медленно движущуюся жидкость.Образец может выглядеть липким от глицерина, а быстрое откачивание может привести к попаданию пузырьков воздуха в головку пипетки.
· образцы после вдыхания пипетирующей головки осторожно перемещают головку жидкости по краю трубы или протирают бумагой, всасывая головку жидкости за пределы капель.Будьте осторожны, чтобы не высосать образец.
Поместите образец в отверстие для образца
· Устройство для пипетирования, чтобы поддерживать небольшое давление, заставлять образцы слегка перемещать головку переполнения жидкости.
· Головка пипетирования, вставленная в буфер немного выше точечных отверстий, поддерживает положительное давление.Кончик пипетки можно вставить в небольшое отверстие.
· Медленно и постепенно образцы выводятся.Наконечник пипетки помещается над отверстием для точечного образца, и образец погружается в отверстие.Позвольте образцу погрузиться, чтобы заполнить отверстие для образца, а не проталкивать его внутрь.
· как только последняя капля образца достигнет жидкой головки, жидкость переместится на вторую опору, медленно поднимите жидкость, переместите ее, выйдите из буфера
Как сделать вертикальный отбор проб клея?
· вертикальные отверстия для образцов в виде точек склеивания, образованные между двумя кусками стекла.При очень тонком клее головку пипетки невозможно даже вставить между двумя стеклянными пластинами.Берегите глицерин!Поместите головку пипетки на отверстие для образца, и образец погрузится в отверстие.
· точечный образец перед тем, обязательно поставьте вертикальную точку отверстия для образца полипропилен-ацил-геля, промывается начисто.Смойте неполимеризованный акриламид и воду, которая может появиться на дне отверстия для пробы.Вода может значительно уменьшить отверстие для пробы.Используйте шприц емкостью 25 мл или 50 мл и иглу 18 калибра.Налейте буфер для электрофореза и тщательно промойте отверстие для пробы.
· может быть трудно увидеть отверстие для пробы, но в то же время все остальное легко.Если есть лишние дырки, буфер для образца можно протестировать бромфеноловым синим.
Время публикации: 31 марта 2023 г.